抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达

• 作者: 唐家琪 操敏 李先富 李光富 潘秀珍 王长军
• 来源期刊: 南京师大学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 3F5单克隆抗体 可变区基因 序列分析 单链抗体基 因 原核表达
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 页码范围: 81-85
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 2939字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4616.2000.02.021

摘要

从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞3F5中提取总RNA,逆转录成cDNA,用合成的寡核苷酸引物通过PCR扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因,用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列,采用PCR拼接法构建单链抗体基因,并插入原核表达载体PEt-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后表达. 序列分析表明所克隆的VL、VH分别属于鼠Ig Kappa轻链IV亚组和Ig 重链Ⅱ亚组.VH、VL 基因均含正确的框架结构,构建的单链抗体基因全长750 bp,在原核系统中的表达产物经SDS-PAGE分析相对分子量约为28000.