hNET基因重组腺病毒载体构建和体外表达

• 作者: 张仕琼 欧晓红 王金蓉 贾志云 邓候富 魏海燕 黄蕤
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 人去甲肾上腺素转运蛋白 同源重组
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 523-526
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3
• 字数: 3492字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2008.04.001

摘要

目的 以复制缺陷的腺病毒为载体,用细菌内同源重组法构建含有人的去甲肾上腺素转运子(human neurotransmitter transporter,hNET)基因的腺病毒载体.方法 利用限制性内切酶Kpn I+Xba I从pCMV5质粒中切下目的 基因hNET,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,形成重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-hNET,Pine I酶切线性化后,与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的 基因的重组体质粒Ad-hNET,Pac I酶切后用脂质体Lipofectamine2000转染HEK293细胞,包装成重组体腺病毒.采用PCR技术和Western Blotting对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有绿色荧光蛋白报告基因检测表达,经过扩增和纯化,测定病毒滴度.结果 测序结果证明hNET序列的正确,PCR、Pac I酶切电泳和Western Blotting证实腺病毒重组质粒Ad-hNET构建成功.扩增纯化后测定重组病毒Ad-hNET的滴度为1.2×1010pfu/mL.结论 成功构建了能表达hNET基因的重组腺病毒载体,为肿瘤的靶向治疗提供前期的研究工作.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓候富	四川大学华西医院核医学科	46	164	7.0	11.0
2	贾志云	四川大学华西医院核医学科	25	104	5.0	9.0
3	欧晓红	四川大学华西医院核医学科	28	85	6.0	8.0
4	魏海燕	四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室	2	5	1.0	2.0
5	黄蕤	四川大学华西医院核医学科	47	150	7.0	10.0
6	王金蓉	四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室	1	4	1.0	1.0
7	张仕琼	四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室	1	4	1.0	1.0