细菌内同源重组法构建LEDGFp52基因腺病毒载体及体外表达

• 作者: 王一 赵海生
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: LEDGFp52基因 腺病毒载体 体外表达
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 英文原著
• 页码范围: 979-983
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 1448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5123.2006.05.002

摘要

目的:构建表达人类晶状体来源的上皮生长因子p52(LEDGFp52)重组腺病毒载体,检测LEDGFp52重组腺病毒能否在真核细胞中有效表达目的基因.方法:将LEDGFp52基因片段亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上构建腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52,将腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-LEDGFp52与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183细菌,经细菌内同源重组产生携带LEDGFp52基因的重组腺病毒载体pAd-LEDGFp52,将pAd-LEDGFp52经脂质体法转化293细胞包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,将Ad-LEDGFp52体外转染293细胞,CPE法及westernblot观察目的基因的表达.结果:构建了表达LEDGFp52基因的重组腺病毒质粒,E.coli内成功同源重组腺病毒,在293细胞内包装产生重组腺病毒Ad-LEDGFp52,滴度可达5×1012 pfu/L.在真核细胞中有效表达目的基因LEDGFp52,出现显著的CPE效应.结论:成功构建表达LEDGFp52的重组腺病毒载体,为进一步进行LEDGF p52基因功能的研究提供了实验基础.