登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

• 作者: 于学东 于曼 刘然 姜涛 李晓峰 秦成峰 秦鄂德 赵慧 邓永强 陈水平 韩剑峰
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 复制子 报告基因 复制 翻译
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 201-206
• 页数: 6页
• 分类号: R373.33
• 字数: 5630字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.03.001

摘要

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用.方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6).将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞.通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测.结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调.结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用.