登革4型病毒5'非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用

• 作者: 于学东 于曼 刘然 姜涛 李晓峰 秦成峰 秦鄂德 赵慧 邓永强 陈水平 韩剑峰
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 登革热病毒 复制子 基因 报告 病毒复制 翻译
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 806-810
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 4132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2008.07.009

摘要

目的 探讨登革4型病毒5'非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用.方法 首先通过mfold 3.2软件对登革4型病毒5'端RNA二级结构进行预测,确定了3个突变位点:SLB1,缺失位于短茎环82-87位5'UAR环化序列,并破坏其保守茎环结构;SLB2,在次环引入突变破坏其环状结构(M77 G/C);SLB3,突变仅涉及核苷酸,不破坏该次环二级结构(M77-78AG/GA).然后在含有海肾荧光素酶(Renilla Luciferase,R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建上述突变体.将突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞.通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因技术和实时定量RT-FCR对突变体的复制和翻译水平进行检测.结果 SLB1突变体的翻译水平并未受到显著影响,但其复制水平出现显著下调.SLB2突变体的翻译水平亦未受到显著影响,但其复制水平受到完全抑制;SLB3突变体的复制和翻译水平均受到了完全抑制.结论 登革4型病毒5'非编码区SLB元件对基因组RNA复制和翻译具有重要的调控作用.