双重靶向条件复制型腺病毒的包装及抗肿瘤作用

• 作者: 刘威武 刘扬 吴嘉慧 李艳博 李金华 王宏芳 王志成 龚守良
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 条件复制型腺病毒 人端粒酶逆转录酶 基因治疗 抗肿瘤
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 308-312
• 页数: 5页
• 分类号: R147
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并包装以人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控E1A(CR2区缺失)蛋白表达的肿瘤细胞双重靶向条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAd),并探讨其对肿瘤细胞的抑制作用.方法 采用PCR技术扩增hTERT启动子序列,将其克隆至pShuttle-E1A-E1Bp-E1B55K载体(E1A基因CR2区缺失)中,构建重组腺病毒质粒,并转染HEK293细胞进行病毒包装,PCR鉴定;CCK-8法检测重组腺病毒(CRAd.p-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,简称CRAd.p)对肿瘤细胞的抑制作用.结果 hTERT启动子序列克隆正确;pShuttle-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K经Kpn Ⅰ单酶切可见1 542 bp和6 775 bp两条电泳带,PCR鉴定得到250、1 148 bp和298 bp基因片段;CRAd.p经PCR扩增得到250、1148 bp和298 bp基因片段,鉴定结果与预期完全相符;CRAd.p感染MCF-7、MDA-MB-231、HepG2和HTC-8细胞72 h后与各自对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01);CRAd.p感染MDA-MB-231细胞后10～250 MOI组细胞吸光度值与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),随着感染时间延长,抑制作用越发明显.结论 成功获得对肿瘤细胞具有双重靶向和溶瘤作用的条件复制型腺病毒,为基因治疗的靶向性和有效性提供了可能.