负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

• 作者: 房殿春 杨仕明 王东旭 罗元辉 蔡永国 郑兴春 陈陵
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝素酶 腺病毒科 复制缺陷型腺病毒载体 转染
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 38-41
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3891字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2006.01.013

摘要

目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-hpa).方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315-hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-hpa,并大量扩增,收集纯化.对纯化后的Ad-hpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml.电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制.PCR双引物鉴定Ad-hpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段.结论成功包装了负盘.