大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定

• 作者: 吴燕峰 唐勇 杨睿 沈慧勇 王鹏 黄文林 黄霖
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 脑源性神经营养因子 基因重组 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 135-139
• 页数: 5页
• 分类号: R342.3
• 字数: 3474字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2006.02.004

摘要

[目的]构建携带大鼠脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并初步检测其体外表达目的基因的能力.[方法]提取大鼠脑组织总RNA,使用RT-PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序,将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中,然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno-XTM腺病毒骨架中,LipofectamineTM2000法转染HEK 293细胞包装携带BDNF目的基因的重组腺病毒,少量提取重组腺病毒DNA检测证实为复制缺陷型BDNF基因重组腺病毒后大量扩增,蛋白电泳及Western blot法初步检测BDNF目的基因在HEK293细胞中的表达.[结果]成功构建了携带大鼠BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并证实其在HEK293细胞中可高水平表达BDNF目的基因.[结论]利用体外连接法可方便、快捷地构建携带BDNF目的基因的复制缺陷型重组腺病毒,并可在体外高水平表达表达其所携带的目的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄文林	中山大学肿瘤防治中心实验研究部	40	232	8.0	13.0