负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

• 作者: 刘志鹏 张方征 游斌 熊晓峰 王洪斌 范亚川 邹利全 陈陵
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: RNA指导的DNA聚合酶 微RNAs 人胚肾293细胞 复制缺陷型腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 页码范围: 896-898
• 分类号: R5
• 字数: 3629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2011.09.026

摘要

目的 包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138).方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化.对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定. 结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010 pfu/mL. 电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制. PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段.结论 成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志鹏	解放军第三二四医院消化内科	16	104	6.0	9.0
2	游斌	解放军第三二四医院消化内科	10	80	5.0	8.0
3	邹利全	解放军第三二四医院消化内科	8	30	5.0	5.0
4	王洪斌	解放军第三二四医院消化内科	4	9	2.0	3.0
5	陈陵	解放军第三二四医院消化内科	6	39	3.0	6.0
6	熊晓峰	解放军第三二四医院消化内科	7	26	4.0	4.0
7	张方征	解放军第三二四医院消化内科	6	21	4.0	4.0
8	范亚川	解放军第三二四医院消化内科	7	17	3.0	4.0