NF-κ Bp65基因siRNA腺病毒载体的构建及其对EOMA细胞的影响

• 作者: 吴伟华 沈振亚 滕小梅 顾国浩
• 来源期刊: 中国血液流变学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA NF-κBp65 腺病毒 EOMA细胞
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 313-316
• 页数: 4页
• 分类号: R392.4
• 字数: 2694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-881X.2008.03.001

摘要

目的 构建含NF-κ Bp65基因siRNA腺病毒载体,并研究其对小鼠血管瘤细胞EOMA中NF-κ Bp65基因表达的影响.方法 首先构建含有NF-κ Bp65 shRNA的人H1启动子真核表达载体pSuperH1/shp65,利用Not I与sal I双酶切将人H1载体扁动子和NF-κ Bp65 shRNA序列亚克隆至经相同酶切的腺病毒穿梭质粒pShuttle中,形成转移质粒pShuttle-H1/shp65,然后转化含有pAdeasy的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,提取含目的 基因的腺病毒重组体质粒,经Pac I酶切线性化后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒Ad-shp65,扩增、纯化,并对病毒滴度进行检测.利用得到的重组腺病毒感染小鼠血管瘤细胞EOMA.采用RT-PCR和荧光定最PCR检测感染前后NF-κ Bp65表达水平的变化,观察Ad-shp65对EOMA中NF-κBp65表达的影响.结果 成功构建NF-κ Bp65 siRNA腺病毒载体,该载体可明显抑制EOMA细胞中NF-κBp65的表达.结论 构建的Ad-shp65腺病毒能有效抑制NF-κ Bp65基因在小鼠血管瘤细胞中的表达,为研究异种移植延迟性排斥反应提供了新的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈振亚	苏州大学附属第一医院心血管外科	276	741	11.0	16.0
2	顾国浩	苏州大学附属第一医院检验科	119	727	13.0	20.0
3	滕小梅	苏州大学附属第一医院心血管外科	22	40	4.0	5.0
4	吴伟华	苏州大学附属第一医院检验科	11	9	2.0	2.0