牛抗菌肽Bac7-Bac5-βdefense串联基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及其产物的活性分析

• 作者: 云孟克 刘建东 刘思国 刘慧芳 孙延鸣 宫强 王勇 王春来 赵昆 迟磊
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛抗菌肽 Bac7、Bac5和β defense融合基因 昆虫杆状病毒表达系统 spodoptera fragiperda 9(Sf9)细胞 重组表达 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 380-384
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.03.003

摘要

根据GenBank中公布的牛抗菌肽bac7、bat5和βdefense(LAP基因)成熟肽基因序列,人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-BacS-β defense,克隆到BAC-TO-BACTM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中,构建了重组转座载体pFASTBac-Bac7-Bac5-βdefense,转化DH10Bac大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-Bac7-Bac5-βdefense,转染昆虫草地夜蛾(Bombyx mandarina)Sf9细胞出现病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾St9单层细胞,收集Si9细胞超声破碎,12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带,分子量大小为20 kD,表达量约占细胞总蛋白的10.6%.体外抑菌实验表明重组的rBac7-Bac5-βdefense蛋白对大肠杆菌,具有抑菌活性.