基于rhaSR嵌合操纵子的穿梭表达载体及其在鱼腥藻细胞中表达的初步研究

• 作者: 喻富根 肖宜安 许东风 贺根和
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 嵌合操纵子 穿梭表达载体 三亲结合 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 130-135
• 页数: 6页
• 分类号: Q94
• 字数: 5240字
• 语种: 中文

摘要

通过PCR等基因重组技术,以pKT-215(起源于RSF1010)为载体,构建了带有PR序列(含rhaSR操纵子表达调控元件、rhaR基因、报告基因gst的嵌合操纵子)和PT序列(含rhaSR操纵子表达调控元件及rhaT基因)的二种穿梭表达载体pKT-PTR、pKT-PR.其中,在RhaR基因上游设计和插入了增强的SD序列.首先将pKT-PTR、pKT-PR分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同培养基条件下,即含鼠李糖与不舍鼠李糖的培养基中进行表达,紫外分光光度计测定GST蛋白(谷胱甘肽-S-转移酶)的活性.结果表明,含嵌合操纵子的穿梭表达载体能在L-鼠李糖的诱导下表达,gst基因的表达量诱导条件下比非诱导条件下高3倍左右,且表达载体上的rhaT基因并不能提高gst的表达;其次,利用三亲结合的方法将2种表达质粒转入鱼腥藻Anabaena sp.PCC 7120中,抗生素筛选后得到能稳定遗传的转基因藻,并以转基因藻的质粒DNA为模板进行PCR检测.最后,转基因藻GST酶活力分析结果表明,嵌合操纵子PR在蓝藻细胞中的诱导表达效率极低,表达条件还需进一步优化.尝试将诱导型的操纵子转入蓝藻,具有潜在的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖宜安	井冈山大学生命科学学院	50	401	12.0	17.0
2	喻富根	南京大学生命科学学院	11	58	5.0	7.0
3	许东风	井冈山大学生命科学学院	17	50	5.0	6.0
4	贺根和	井冈山大学生命科学学院	24	111	7.0	9.0