不同血清群问号钩端螺旋体mce基因序列分析及表达模式的研究

• 作者: 严杰 张磊 李立伟 毛亚飞 薛峰
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体,问号 基因表达 序列分析,DNA mce基因 克隆/表达 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 564-571
• 页数: 8页
• 分类号: R377.5
• 字数: 5204字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2008.06.005

摘要

目的:确定问号钩端螺旋体(简称钩体)株携带侵袭相关mce基因情况,原核表达mce基因并制备其抗血清,了解问号钩体感染细胞前后mce基因转录水平的变化.方法:采用PCR扩增13株问号钩体和1株双曲钩体全长mce基因片段,T-A克隆后测序.采用基因工程技术构建mce基因原核表达系统,SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图象分析系统检查目的重组蛋白rMce表达情况,采用Western Blot对表达的rMce进行鉴定.采用皮内免疫法制备兔抗rMce血清,免疫双扩散试验测定其效价.采用实时荧光定量RT-PCR,检测问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染J774A.1细胞前后mce基因转录水平的变化.结果:我国13株问号钩体株均携带mce基因,双曲钩体三宝垄群patoc型Patoc Ⅰ株则否.与报道的序列(GenBank accession No.:NP712236)比较,所克隆的mce基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.02%～100%和97.91%～100%.所构建的mce基因原核表达系统能表达rMce,其产量为细菌总蛋白的5%.问号钩体56601株全菌抗血清能有效识别rMce.问号钩体56601株感染细胞后mce基因转录水平明显上调.结论:mce基因仅存在于致病性的问号钩体中,且其转录水平呈细胞接触上调模式,表明该基因与问号钩体致病性密切相关.mce基因产物是序列保守的外膜蛋白.所构建的mce基因原核表达系统及所制备的rMce抗血清为深入研究该基因功能提供了有效的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
5	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学系	41	232	9.0	12.0
9	李立伟	浙江大学医学院病原生物学系	34	277	7.0	15.0
10	张磊	浙江大学医学院病原生物学系	167	1263	18.0	29.0
11	薛峰	浙江大学医学院病原生物学系	4	37	3.0	4.0