高活性β-内酰胺酶的分离、表达和性质

• 作者: 吕建新 王震 田宇鑫 赖飞 赵峰
• 来源期刊: 细胞生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: β-内酰胺酶 DNA家族改组 最低抑菌浓度 耐药
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 667-672
• 页数: 6页
• 分类号: Q5
• 字数: 5320字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7666.2008.05.023

摘要

应用DNA家族改组方法制备TEM型β-内酰胺酶基因突变文库,利用平皿初筛和琼脂稀释法复筛获得一株酶活力增高的突变体blaTEMm.带有该突变基因的大肠杆菌,其最低抑菌浓度(MIC)比带有野生型blaTEM的大肠杆菌高2～4倍(氨苄青霉素)、4～8倍(头孢唑啉)、4～8倍(头孢呋辛)、16～32倍(头孢他啶)、8倍以上(头孢曲松)和4～8倍(头孢噻肟).在E.coli BL21(DE3)高效表达blaTEM和blaTEMm,利用离子交换柱层析和凝胶过滤层析对包涵体进行柱上复性和纯化,获得纯度达90%的重组蛋白质.酶动力学分析显示,与野生型蛋白相比,突变蛋白酶促反应的kcat/Km值分别增加1.5倍(青霉素G)、4.4倍(氨苄青霉素)、3.1倍(头孢唑啉)、2.8倍(头孢他啶),但是对头孢噻肟的kcat/Km下降了2.5倍.DNA序列分析显示易blaTEMm发生7处碱基置换,造成4个氨基酸改变,即S59G、R164S、A237T和E240K.应用Swiss-Pdb Viewer3.7软件预测蛋白质的三维结构,显示这些突变不影响酶的活性中心,但是变异造成的蛋白质空间结构的细微变异增加了酶和底物的亲和性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕建新	温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室	153	1535	21.0	32.0
2	赵峰	温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室	18	72	5.0	8.0
3	赖飞	温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室	1	1	1.0	1.0
4	田宇鑫	温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	王震	温州医学院检验医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室	18	98	5.0	9.0