人类重组PIF1解螺旋酶C-末端多肽的纯化及其抗体制备

• 作者: Kenji Kamiya 顾永清
• 来源期刊: 农垦医学
• 学科: 生物学
• 关键词: PIF1解螺旋酶 蛋白纯化 抗体制备
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础与临床医学
• 页码范围: 449-452
• 页数: 4页
• 分类号: Q814
• 字数: 2631字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1127.2008.06.001

摘要

目的:表达纯化人类PIF1解螺旋酶c-末端的338-641氨基酸的多肽PIF338-641,同时用纯化蛋白制备特异抗体.方法:从HeLa细胞的cDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶c-末端1012-1926的cDNA片段(对应氨基酸338-641),插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b-PIF338-641重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞,使PIF338-641蛋白在大肠杆菌中表达,用自制的镍亲和柱纯化PIF338-641蛋白,并以纯化蛋白免疫家兔制备抗血清.结果:PIF338-641蛋白在大肠杆菌中成功表达,纯化了PIF338-641蛋白并制备了PIF338-641蛋白抗血清.结论:制备的PIF338-641蛋白抗体能与蛋白发生特异的免疫反应.