H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析

• 作者: 刘思当 张存 徐丽华 王一成 王方昆 袁秀芳
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 NS1基因 反应原性
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 587-592
• 页数: 6页
• 分类号: S5
• 字数: 5044字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.02.038

摘要

[目的] 对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein 1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的 ELISA试剂盒的研制奠定基础.[方法] 采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NSl基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)上构建成重组质粒pET-NS1,转化受体菌E. coli BL21-DE3感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出正确重组质粒转化子.[结果] 经终浓度5 mmo1.L-1乳糖诱导,SDS-PAGE 电泳结果显示,重组蛋白NSl得到大量表达,分子质量约为26kD.经Western-blotting分析,表达蛋白能与阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应;ELISA检测显示,在被检血清稀释1 280倍时,阳性血清的OD650 值大约是阴性血清的3倍,差异明显. [结论] 重组蛋白BS1表达量高,易于纯化并且具有良好的血清学反应的特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘思当	山东农业大学动物科技学院	248	1396	16.0	32.0
2	张存	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	42	177	7.0	10.0
3	王一成	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	61	386	11.0	16.0
4	袁秀芳	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	65	353	11.0	15.0
5	徐丽华	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	57	355	11.0	16.0
6	王方昆	山东农业大学动物科技学院	16	46	4.0	6.0