毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

• 作者: 卞庆松 姜连连 张建哲 董辉 赵其平 闫晓菲 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 球虫 毒害艾美球虫 孢子化卵囊 cDNA文库 SMART技术
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 196-199
• 页数: 4页
• 分类号: S852.723|Q81
• 字数: 3683字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.03.004

摘要

为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA,采用SMART技术,在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA,经LD-PCR扩增合成双链cDNA(ds cDNA).经蛋白酶K消化、Sfi I酶切,过CHROMA SPIN-400TM柱去除小于400 bp的片段,与?TriplEx2TM噬菌体载体连接,用Gigapack ⅢGoldTM载体蛋白包装,构建了cDNA噬菌体表达文库.经测定,原始文库容量为4.72×106pfu/mL,扩增后的文库容量为2.62×1010pfu/mL,重组率为97.5%,插入片段为500～1100 bp.证实,该文库质量良好,为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础.