利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库

• 作者: 严若峰 刘连瑞 宋小凯 张振超 徐立新 李梦辉 李祥瑞 涂浩 黄经纬
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 巨型艾美耳球虫 孢子化卵囊 gateway技术 cDNA表达文库
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 630-635
• 分类号: S852.73
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2015.04.016

摘要

[目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库.[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用CloneMinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库,然后将cDNA从初级文库重组到pVAX1.0上,构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,最后用7个已知巨型艾美耳球虫基因的引物鉴定文库.[结果]构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库总容量为0.92× 107 CFU,插入片段平均大小为1.63 kb;表达文库总容量为2.32×107CFU,插入片段平均大小为1.64 kb.两种文库的阳性重组率均为100％.能用特异性引物从该表达文库扩增出7个已知的巨型艾美耳球虫基因.[结论]该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础.