柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建

• 作者: 张彦明 才学鹏 景志忠 林青 田广孚 窦永喜 翟军军 闫鸿斌
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 孢子化卵囊 子孢子 cDNA表达文库 构建
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 999-1002
• 页数: 4页
• 分类号: S852.72+3|Q785
• 字数: 3173字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2007.09.020

摘要

在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ定向接头.将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间.用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增.以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella 3-1E基因,并进行测序.结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×106 pfu/mL,插入片段约100～3 000 bp,扩增得到特定的E. tenella 3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具.