大容量天然噬菌体抗体库的建立及多样性初步验证

• 作者: 沈倍奋 王琰 王辉 黄英
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬菌体抗体库 Cre/LoxP重组系统 单链抗体
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 305-308,358
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 4904字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.04.002

摘要

目的:构建超大容量天然噬菌体抗体库.方法:从正常人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞(>180份),提取RNA,用RT-PCR分别扩增抗体可变区轻重链基因(VH和VL),通过重叠PCR技术将VH和VL连接为单链抗体ScFv形式,克隆插入到pDF噬菌粒载体,转化XL1-Blue细菌得到ScFv初级抗体库,并以高感染复数(MOI≥100)感染Cre+菌株BS1365,利用Cre/LoxP位点特异性重组原理,使VH和VL基因定向同源重组匹配,随后以低感染复数(MOI<1)感染XL1-Blue,获取次级工作库.分别用5种不同抗原进行筛选,所获阳性克隆送测序以获取抗体基因.结果:抗体V区基因得到有效扩增,初级库库容3.6×107,工作库容1.8×1011,5种不同抗原筛选均得到特异性结合噬菌体抗体;测序结果表明,所获取抗体涵盖了不同的基因亚群,进一步证明抗体库具有良好的多样性.结论:经Cre/Loxp定位重组系统成功构建了超大容量天然噬菌体抗体库,初步尝试对5种抗原进行筛选均获成功,提示该抗体库多样性较好,可用于制备人源抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈倍奋	军事医学科学院基础医学研究所	213	1497	18.0	31.0
2	王琰		59	302	9.0	14.0
3	黄英	军事医学科学院基础医学研究所	23	122	5.0	10.0
4	王辉	军事医学科学院基础医学研究所	5	8	2.0	2.0