天然人源IgG Fab噬菌体抗体库的构建及多样性分析

• 作者: Hiroshi Tachibana 付永峰 冯萌 杨彬 程训佳 章黎 邵红霞
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示库 免疫球蛋白Fab片段 免疫球蛋白重链基因 抗体多样性
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 1007-1010,1015
• 分类号: R392.1
• 字数: 5085字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2010.11.010

摘要

目的:构建天然人源IgG Fab噬菌体抗体库并分析来源于健康人外周血B淋巴细胞的抗体基因可变区的多样性及优势选择.方法:以DNA重组技术从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入噬菌体载体pFabICN相应位置,构建天然人源免疫球蛋白G基因文库;进一步从抗体库中随机挑选克隆,获得重轻链基因进行核苷酸序列测定并利用IgBLAST 数据库分析抗体基因可变区的同源家族.结果:从4×108库容的天然人源IgG Fab噬菌体抗体库中随机挑选克隆,对其中32个轻链及重链Fd基因插入正确的克隆进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推算,获得29条彼此完全不同的Fd重链基因及轻链基因.以IgBLAST 数据库比对分析显示29条重链基因的V区分别属于VH3(72.4%),VH1(10.3%),VH4(6.9%),VH5(6.9%)和VH7(3.4%)基因家族.29条轻链基因分别属于Vκ1(44.8%),Vκ2(15.4%),Vκ3(11.5%),Vκ4(23.1%)基因家族和Vλ1(11.5%)基因家族.结论:以300份健康人外周血淋巴细胞的抗体基因构建的天然人源IgG Fab噬菌体抗体库基因多样性良好,重链VH3基因家族存在优势表达.