靶向人端粒酶逆转录酶基因小片段干涉RNA慢病毒表达载体的构建与鉴定

• 作者: 傅震 刘宁 尤永平 王存祖 赵鹏 陆小明 陈云祥 鲁艾林
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 人端粒酶逆转录酶基因 RNA干涉
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4198字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1003-9406.2008.01.007

摘要

目的 通过构建靶向人端粒酶催化亚基人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)RNA干涉(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础.方法 根据hTERT设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链插入到pLVTHM质粒,生成含RNAi盒的载体,然后与pCMV-dR8.74和pMD2G病毒包装所必须的元件经脂质体导入T293细胞,包装成慢病毒,收集上清浓缩病毒并检测其滴度.所得病毒感染U87胶质瘤细胞,逆转录PCR和端粒重复序列扩增法(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)检测干扰后细胞内hTERT表达变化及端粒酶表达变化,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功;成功包装成高滴度的慢病毒.逆转录PCR和TRAP检测结果证实构建的hTERT-小片段干涉RNA(small interference RNA,siRNA)慢病毒表达载体可显著抑制hTERT基因的表达和端粒酶活性并导致细胞凋亡.结论 成功构建了携带靶向hTERT基因的RNAi慢病毒载体.该载体能够有效抑制hTERT的表达和端粒酶活性并导致细胞凋亡,为以hTERT为靶点的胶质瘤基因治疗的后续研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈云祥	南京医科大学附属第一医院神经外科	18	49	4.0	6.0
2	刘宁	南京医科大学附属第一医院神经外科	136	504	11.0	15.0
3	傅震	南京医科大学附属第一医院神经外科	110	506	12.0	15.0
4	尤永平	南京医科大学附属第一医院神经外科	72	306	10.0	14.0
5	赵鹏	南京医科大学附属第一医院神经外科	31	96	7.0	9.0
6	王存祖	南京医科大学附属第一医院神经外科	12	45	4.0	6.0
7	陆小明	南京医科大学附属第一医院神经外科	29	87	6.0	8.0
8	鲁艾林	南京医科大学附属第一医院神经外科	47	160	7.0	9.0