小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立

• 作者: 周洁 周艳 胡建华 高诚
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠肝炎病毒 重组N蛋白 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 39-43
• 页数: 5页
• 分类号: Q93-332
• 字数: 4697字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2008.11.010

摘要

目的 运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法.方法 将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法.结果 确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1:200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1:3000.S/P≥0.386则为阳性,S/P<0.308为阴性,两者之间为可疑.经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好.与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%.用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性.结论 本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础.