胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选

• 作者: 刘思国 刘慧芳 司微 杜艳芬 王春来 王聃 赫明雷 赵海玲
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 胸膜肺炎放线杆菌 体内诱导抗原技术 菌落原位免疫杂交
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 847-850
• 页数: 4页
• 分类号: S852.619
• 字数: 3624字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2008.10.005

摘要

利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了初步筛选.将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合,分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21(DE3)的全菌及全菌裂解物进行吸附,用ELISA方法检测吸附效果,经吸附后血清D450nm分别由原来的0.927和0.239降低为0.196和0.078.同时,将APP1基因组DNA以Bsp143 Ⅰ进行酶切,回收500～2000 bp的片段,与pET30a/b/c载体连接,构建了APP1基因组质粒表达文库,库容量(CFU)为2.0×105.用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库,从3 000个菌落中获得了12个阳性克隆.