猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣA 2.5kb基因片段的分子克隆及其表达

• 作者: 佟恒敏 刘思国 张秀华 王春来 邵美丽 郭洋 郭设平
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣA基因 融合表达 猪
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 525-528
• 页数: 4页
• 分类号: S852.619
• 字数: 2804字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.07.007

摘要

以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清1型国内分离株72-1株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出ApxⅣA基因2.5kb特异片段,将其克隆于pMD18-T中,经酶切鉴定筛选重组质粒后进行核苷酸序列测定,并与GenBank中登录的血清1型ApxⅣA(AX002405)基因进行比较,结果显示核苷酸同源性为99.5%.将该片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的EcoRⅠ/SalⅠ位点,成功地构建了重组表达载体pGEX-apxⅣA,并转化大肠埃希氏菌BL21,获得了表达.SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为117ku,与预期片段大小相符;Western-blotting分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性.