兔出血症病毒遗传变异分析及RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘月环 楼琦 石巧娟 郭红刚 金晓音
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 兔病毒性出血症病毒 衣壳蛋白基因 遗传变异 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 44-49
• 页数: 6页
• 分类号: R373
• 字数: 5048字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2008.11.011

摘要

目的 获得兔出血症病毒(浙江分离株)近20年间遗传变异概况,建立兔出血症病毒的RT-PCR检测方法.方法 对1989～2006年间的7株RHDV浙江分离株的衣壳蛋白基因(VP60)进行了克隆与测序,并与国内、外RHDV的基因组序列进行了遗传比对和分析;根据兔出血症病毒株的VP60设计引物,对20只人工感染兔的实质脏器、全血和350只实验兔全血样本进行了检测.结果 7株RHDV的VP60基因均由1740个核苷酸组成,编码580个氨基酸.它们与参考序列之间的氨基酸同源性为94.0%～99.8%.系统发生树分析结果显示,RHDV可划分为2个大的基因群,浙江(中国)的RHDV分离株主要集中于C亚群.RT-PCR检测方法表明20只实验兔全部扩出预期条带,而350只实验兔全血检测中出现13只RHDV可疑样本.经血凝抑制试验检测,13例PCR阳性样品中有10个HAI阳性,3个阴性.检测敏感度达100%.特异性为99.12%,经统计检验,kappa=0.865,表明PCR检出RHDV的结果与HAI高度一致.结论 RHDV基因群之间的遗传距离有逐渐加大的趋势.我们建立的RT-PCR法可用于RHDV浙江分离株的检测,用RT-PCR检测全血中RHDV方法的建立为活体检测RHDV打下了基础.