人γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因E-box元件功能初步分析

• 作者: 冉丕鑫 李冰 罗伶俐 邹国民
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 16HBE细胞 A549细胞 基因,GCLC γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 1428-1430
• 页数: 3页
• 分类号: R34
• 字数: 2241字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.07.036

摘要

目的:探讨人支气管上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)基因上游调控序列E-box元件的功能.方法:利用PCR法克隆人GCLC基因上游调控序列,PCR重叠延伸法对2个E-box元件分别和同时进行定点突变.扩增获得的突变体片段克隆入PMD18-T载体,DNA测序鉴定后,亚克隆入野生型GCLC*Luc荧光素酶报道载体.将3个突变体质粒和野生型质粒转染人肺泡上皮细胞A 549和人支气管上皮细胞16HBE,检测转染后细胞荧光素酶活性值.结果:测序结果证实,成功将E-box1 CACGC,G突变为AGCGGG;E-box2 CACGTG突变为CACG93A.GCLC-Luc、GCLC-mEbox1-Luc(突变E-box1)、GCLC-mEbox2-Luc(突变E-box2)、GCLC-mEbox12-Luc(突变E-box1和E-box2)转染A549细胞后荧光素酶活性值分别为(5 197 852±132 206)U、(5 455 692±127 431)U、(5 315 722±244 197)U、(5 174 303±183 179)U,转染16HBE细胞后荧光素酶活性值分别为(141 157±18 907)U、(126 454±23 724)U、(137 315±22 179)U、(132 441±28 970)u.经过统计学分析,各组荧光酶活性没有显著差别,均P>0.05.结论:E-box元件不参与基础状态下A549细胞和16HBE细胞GCLC基因转录调控.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冉丕鑫		4	7	2.0	2.0
2	罗伶俐		1	5	1.0	1.0
3	邹国民		1	5	1.0	1.0
4	李冰		1	5	1.0	1.0