问号钩端螺旋体鞭毛蛋白相关蛋白FliH/Ⅰ/Y/N基因原核表达和膜定位

• 作者: 严杰 廖苏梅 徐韩飞 李立伟 杨平 毛亚飞 阮萍
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 问号钩端螺旋体 鞭毛相关蛋白 基因克隆 原核表达 免疫原性/定位
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 597-601
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4020字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.07.005

摘要

目的 克隆问号钩端螺旋体(简称钩体)鞭毛相关蛋白编码jliH、fliⅠfliH、和fliN并构建其原核表达系统,制备表达产物抗血清并了解其蛋白的定位.方法 以苯酚-氯仿法提取的问号钩体黄疸出血群赖型赖株基凶组DNA为模板,用PCR扩增全长fliH,fliⅠ,firY和flfliN基因片段,T-A克隆后测序,继而构建上述目的 基因克隆的原核表达系统.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图像分析系统检查重组蛋白rFliH、rFliI、rFliY和rHiN的表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯目的 表达产物.皮下免疫家兔获得4种目的 重组蛋白抗血清,用ELISA和Western blot分别检测抗血清效价并了解抗血清与相应抗原结合的能力.采用免疫电镜技术对FliH、FliⅠ、FliY和FliN进行定位.结果 PCR扩增获得大小分别为924、1365、1065和318 bp的全长fliH,fliⅠ,fliY和fliN基因片段,与报道的序列比较.其核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.所构建的原核表达系统均能有效地表达目的 重组蛋白,其产量均约为20%.rFliH、rFliⅠ、rFliY和rHiN蛋白免疫家兔后能产生抗体,其兔抗血清ELISA效价达到1:100 000以上,并分别识别钩体相应重组蛋白和膜蛋白提取物而出现明显的Westem杂交条带.FiH、FliⅠ、FliY和FliN蛋白分布于问号钩体内膜、外膜或内外膜之间.结论 本研究成功地构建了能高效表达问号钩体鞭毛相关蛋白FliH、FliⅠ、FIiY和HiN的原核表达系统,并获得了能有效识别上述蛋白抗原的高效价抗血清.鞭毛相关蛋白HiH、Flil、FliY和FIiN是问号钩体内膜或外膜蛋白成分.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学系	41	232	9.0	12.0
3	李立伟	浙江大学医学院病原生物学系	34	277	7.0	15.0
4	廖苏梅	浙江大学医学院病原生物学系	7	235	3.0	7.0
5	徐韩飞	浙江大学医学院病原生物学系	2	4	2.0	2.0
6	杨平	浙江大学医学院电镜室	11	50	4.0	6.0
7	阮萍	浙江省绍兴文理学院医学院	2	4	2.0	2.0