东方粘虫(Pseudaletia separata(Walker))微卫星富集文库的构建与分析

• 作者: 张国彦 翟保平
• 来源期刊: 生态学报
• 关键词: 东方粘虫 微卫星 富集文库 序列分析
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 页码范围: 3860-3867
• 页数: 8页
• 分类号: Q143
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-0933.2008.08.044

摘要

根据生物素与链亲和素的强亲和性原理,用包被链亲和素的磁珠亲和捕捉与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针(CA)15、(GA)15、(GTT)12、(GAT)12、(TAGA)8 和 (GTGA)8退火结合的含接头和微卫星序列的单链粘虫基因组DNA限制性酶切片段,获得单链目的片段.经PCR扩增形成双链后连接到pGEM-T 载体上,再转化到DH5α热感受态细胞中,首次成功构建粘虫基因组微卫星富集文库.随机抽样(16次抽样,每库共12～114个克隆)测序发现,6个文库总的微卫星阳性克隆率30.07%,CA/GAT/GTT 等3个文库的阳性克隆率达到40%以上.单次抽样最高阳性克隆率达到56%.粘虫微卫星富集文库的建立和高多态性微卫星单拷贝位点的筛选将为粘虫的生态遗传学研究、连锁图谱构建、分子进化和系统发育研究等提供大量遗传标记,对昆虫迁飞的分子生态研究也有重大意义.