EHECO157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC)的表达纯化及免疫检测的初步应用

• 作者: 敬华 易勇 毛旭虎 罗云 肖敏 邹全明
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 紧密粘附素 克隆表达 免疫检测
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1473-1476,1555
• 页数: 5页
• 分类号: R115
• 字数: 4803字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8685.2008.08.003

摘要

目的:克隆表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段(intiminC),摸索其免疫检测的初步应用.方法:设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增紧密粘附素胞外特异性片段的编码基因eaeC,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-21a(+)-eaeC,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测.目的蛋白经包涵体洗涤,使用含谷胱甘肽氧化还原系统的复性缓冲液进行稀释并结合透析复性后,再用阴离子交换柱Resource Q和分子筛柱Superdex 200进行纯化.将所得高纯度目的蛋白包被ELISA酶标板,对实验动物的免疫血清进行检测.结果:PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增出了约570 bp的目的片段;原核表达质粒pET-21a(+)-eaeC经酶切及测序鉴定与设计序列-致.转化E coli BL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约35%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约20×103,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达.包涵体复性后目的蛋白纯化效果明显,高纯度的intiminC蛋白包被ELISA板,对实验室动物免疫血清的检测效果良好.结论:EHEC O157:H7紧密粘附素胞外特异性片段经基因克隆后获得了较好的表达,复性纯化后获得高纯度的目的蛋白intiminC,在此基础上建立的ELISA检测方法对实验室动物免疫血清的检测效果良好.为进-步的人血清抗体检测及EHEC O157:H7感染的流行病学研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全明	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室	258	1589	19.0	26.0
2	毛旭虎	第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室	87	417	12.0	16.0
3	罗云		4	15	2.0	3.0
4	易勇	北京解放军306医院检验科	2	2	1.0	1.0
5	肖敏	北京解放军306医院检验科	1	2	1.0	1.0
6	敬华	北京解放军306医院检验科	1	2	1.0	1.0