反向荧光偏振(FP)检测血清中HBV多聚酶基因突变

• 作者: 罗进 郭晏海
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 荧光偏振 突变 HBV DNA
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 临床检验
• 页码范围: 1812-1813,1818
• 页数: 3页
• 分类号: R512.6+2
• 字数: 2091字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8685.2008.09.048

摘要

目的:建立简便的HBV多聚酶基因序列中拉米呋啶耐药性相关的基因突变的检测方法.方法:利用pfu酶的3'-5'外切校正功能和荧光偏振光检测技术进行点突变的检测.首先PCR扩增HBV多聚酶基因,然后用3'标记荧光分子FAM的探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交,使探针3'第一个碱基与靶序列中待测点的碱基配对.若碱基配对正确,pfu酶可以沿探针的3'端延伸;若碱基配对错误,pfu酶须将探针3'标有荧光分子的核苷酸切掉,然后再沿探针3'端延伸.由于第一种情况,荧光分子与DNA链相连,分子量增加,则荧光偏振光值增大;而第二种情况,荧光分子与探针分离,荧光分子的整体分子量减小,则荧光的偏振光值减小,这样可以通过荧光偏振光值的大小判断待测点核苷酸的改变.结果:该方法可以检测出HBV多聚酶基因序列中特定位置的核苷酸类型,可以检测1×10~1个拷贝的模板量.对30例经过6个月以上拉米呋啶治疗的患者血清进行检测,检测出其中有3例是甲硫氨酸(M)密码子ATG中的A→G变异;2例是ATG中的G→C变异;1例是ATG中的C→T.结论:该技术可以对血清中HBV多聚酶基因序列中点突变以及其他基因突变进行检测.