抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素单克隆抗体的制备及初步应用

• 作者: 姚丰华 张伟娟 张志妮 朱军 朱国强 林燕清 顾万军 黄良宗
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣ毒素 表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 细菌
• 页码范围: 36-42
• 页数: 7页
• 分类号: S858.282.619|Q785
• 字数: 6428字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2009.04.008

摘要

据猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)apxⅣ毒素基因5'端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App 1～12血清型菌株的保守5'端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为35.3 kDa的可溶性重组蛋白.以亲和层析试剂盒纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗ApxⅣ毒素单克隆抗体(McAb).以间接ELISA法筛选到两株分泌稳定、抗体亚类均为IgGl的杂交瘤细胞587和5C11,其培养上清和小鼠腹水抗体效价分别为1:64、1:128和1:64 000、1:128 000.两株单抗与临床猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道繁殖障碍综合征病毒、猪黄、白痢产肠毒素大肠杆菌和猪肺疫多杀性巴氏杆菌感染阳性血清均不发生交叉反应,显示出良好的特异性.竞争性结合试验表明两株单抗识别不同的抗原结合表位.以(NH4)2SO4盐析法纯化的5C11小鼠腹水单抗包被酶标板,生物素标记纯化的587单抗建立了检测ApxⅣ毒素的双抗体夹心ELISA法,其包被单抗最佳工作浓度为4μg/ml,生物素标记单抗最佳工作浓度为0.8 μg/mL,对重组表达ApxⅣ毒素(rApxⅣ)的最低检出量为60 pg/mL.从10份临床病猪血清样本中检出6份ApxⅣ毒素阳性,与细菌分离鉴定和PCR结果相符合,结果表明此法可用于App感染的临床诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱国强	扬州大学兽医学院	183	1462	21.0	30.0
2	顾万军	佛山科学技术学院生命科学学院	80	641	15.0	22.0
3	黄良宗	佛山科学技术学院生命科学学院	45	251	8.0	14.0
4	林燕清	扬州大学兽医学院	4	42	3.0	4.0
5	朱军	扬州大学兽医学院	22	120	6.0	9.0
6	姚丰华	扬州大学兽医学院	24	80	5.0	8.0
7	张志妮	扬州大学兽医学院	3	10	2.0	3.0
8	张伟娟	扬州大学兽医学院	2	18	2.0	2.0