绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因ORF117的克隆及其原核表达

• 作者: 于三科 侯俊玲 才学鹏 李辉 王晓霞 郑亚东 陈轶霞 骆学农
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊痘病毒 ORF117基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 337-341
• 页数: 5页
• 分类号: S852.654
• 字数: 3881字
• 语种: 中文

摘要

以甘肃景泰疑似羊痘(SP)患病绵羊的皮肤组织中提取的总DNA为模板,经PCR扩增获得SP病毒(SPV)ORF117基因.测序后分析表明,该基因由591个核苷酸组成,编码196个氨基酸;将该基因克隆于pET32 载体中,构建重组表达质粒pET-ORF117,用IPTG在不同条件下诱导表达,确定其最佳表达条件.SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白分子质量为42 ku,主要以包涵体的形式存在.在IPTG浓度为0.1 mM、温度为37℃、诱导6 h时表达量最大,约占菌体蛋白的30%.Western blot试验表明,融合蛋白可被羊痘阳性血清识别,这为研究其在新型疫苗和诊断的研究奠定了基础.