枯草杆菌可溶性YlyA蛋白的诱导表达与纯化研究

• 作者: 霍乃蕊 高文伟
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 枯草杆菌 可溶性YlyA 诱导表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 418-422
• 页数: 5页
• 分类号: Q936
• 字数: 3710字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2009.03.024

摘要

YlyA是枯草杆菌一种功能未知蛋白.本研究旨在建立可溶性YlyA的诱导表达体系和纯化方法,为其功能研究奠定基础.PCR扩增ylyA序列,将其克隆到pETMCSⅢ中构建表达载体pNG252,用IPTG诱导6×His-YlyA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行分析,最后对可溶性YlyA重组蛋白进行Ni2+-WTA亲和层析加以纯化.结果表明pNG252中ylyA的插入方向正确,序列无突变;用0.5 mmol/L IPTG,37℃诱导3 h时,YlyA虽高效表达,但为包涵体形式;调整诱导条件至0.05 mmoL/L IPTG,25℃,5 h时,高效表达的YlyA部分转为可溶性蛋白.纯化后的YlyA浓度达204.2119 μmoL/L;调整洗涤液中的咪唑浓度至15 mmol/L,pH至9,可使纯化蛋白的产量大幅提高.本文成功构建了YlyA高效可诱导表达载体,建立了可溶性蛋白的诱导表达条件,确立了Ni2+-NTA亲和层析纯化方法,所得的6×His-YlyA融合蛋白,可用于YlyA晶体结构和与功能分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	霍乃蕊	山西农业大学食品科学与工程学院	86	578	12.0	21.0
2	高文伟	山西农业大学动物科技学院	28	202	9.0	13.0