双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株

• 作者: 刘小银 岳华 张兆敏 张斌 李明义 汤承 马莉
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感H5亚型 强毒力新城疫 双重RT-PCR 快速检测
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 4470字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2009.02.018

摘要

本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIV H5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIV H5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h.对24份临床疑似样本进行检测,AIV H5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5NI和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和La Sota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性.可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳华	西南民族大学生命科学与技术学院	187	1071	15.0	23.0
2	汤承	西南民族大学生命科学与技术学院	194	1150	15.0	24.0
3	马莉	中国医学科学院成都输血研究所	29	164	5.0	12.0
4	张斌	西南民族大学生命科学与技术学院	44	166	8.0	10.0
5	李明义		13	90	6.0	9.0
6	张兆敏	西南民族大学生命科学与技术学院	10	25	4.0	4.0
7	刘小银	四川大学华西第二医院发育与干细胞生物学研究所	3	4	1.0	2.0