大叶栎ISSR扩增体系的优化

• 作者: 刘光金 周传明 梁文汇 梁机 谢素平 谭健晖 黄婷 黄寿先
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大叶栎 ISSR 反应体系 优化
• 年，卷（期）: 2009,（22）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 10424-10425,10428
• 页数: 3页
• 分类号: S792.18
• 字数: 1612字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2009.22.037

摘要

[目的] 探讨影响大叶栎ISSR扩增效果的因素,建立大叶栎ISSR扩增的优化体系.[方法] 以新嫩的大叶栎叶片为试材,采用改良CTAB法提取大叶栎叶片基因组DNA,并将DNA浓度稀释到30 ng/μl,采用单因素试验设计测试DNA模板、PCR缓冲液和Taq DNA 聚合酶的用量以及底物dNTP终浓度和引物终浓度对ISSR扩增的影响.[结果] 大叶栎的ISSR扩增的最优反应体系为:总体积20 μl中含有DNA模板60 ng、PCR缓冲液10×buffer为2.0 μl,底物dNTP终浓度为0.25 mmol/L,引物终浓度为0.3 μmol/L,Taq DNA 聚合酶为1 U.在该体系下,能够扩增出清晰、多态性高的条带,能够满足大叶栎种群ISSR多样性分析的要求.[结论] 建立了大叶栎ISSR扩增的优化体系,为研究广西的大叶栎种群遗传多样性提供了技术基础.