香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

• 作者: 刘建杰 叶生月 吴慧敏 张慧 曾燕如 陈钢
• 来源期刊: 浙江农林大学学报
• 关键词: 经济林学 香榧 ISSR-PCR 引物筛选
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 页码范围: 87-92
• 页数: 6页
• 分类号: S664.5|S722.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0756.2010.01.014

摘要

以香榧Torreya grandis‘Merrillii'基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的Taq酶用量、Mg~(2+)浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和引物浓度等进行了优化试验.优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为:总容积20μL,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350 μmol·L~(-1)引物,1.625 mmol·L~(-1)Mg~(2+),0.250 mmol·L~(-1)dNTPs,10 × PCR buffer 2μL.PCR扩增程序:94 ℃变性5.0 min;35个循环:94℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72℃延伸1.5 min;最后72℃延伸7.0 min,4℃保温.在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度.研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础.