正交设计优化绿竹ISSR-PCR体系和引物筛选

• 作者: 何天友 徐雯 瞿印权 荣俊冬 郑郁善 韩笑
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 绿竹 ISSR 正交试验设计 反应体系 扩增程序 引物筛选
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 103-110
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0004

摘要

旨在建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序,并筛选适于绿竹ISSR-PCR分析的高多态性引物.以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板,采用正交试验方法,对dNTPs浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA用量设计5因素4水平试验,采用极差分析法和方差分析法对试验结果进行分析.并对退火温度和循环次数进行筛选,建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序.并利用优化后的体系对100条ISSR引物进行筛选.最终确定的最佳反应体系为:20μL的扩增体系中,dNTPs浓度为0.2 mmol/L,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,TaqDNA聚合酶浓度为1.5 U,引物浓度为0.4μmol/L,DNA浓度为60 ng,10×PCR Buffer体积为2μL、剩下用灭菌ddH2O补全.各因素影响大小依次是:Mg2+>dNTPs>模板DNA>Taq DNA聚合酶>引物.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,(根据引物的退火温度)复性30 s,72℃延伸90 s,循环38次,72℃延伸10 min,4℃保存.以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出14条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑郁善	福建农林大学林学院	303	2600	26.0	39.0
2	荣俊冬	福建农林大学林学院	178	835	14.0	19.0
3	何天友	福建农林大学艺术学院园林学院	110	409	10.0	14.0
4	徐雯	福建农林大学林学院	13	35	3.0	4.0
5	瞿印权	福建农林大学林学院	13	34	3.0	4.0
6	韩笑	福建农林大学林学院	4	6	2.0	2.0