荧光定量PCR方法快速检测原料乳中的大肠杆菌

• 作者: 付宇 周微 孟祥晨 张伟钦 贡汉生
• 来源期刊: 中国乳品工业
• 学科: 工学
• 关键词: 大肠杆菌 原料乳 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 测定方法
• 页码范围: 39-42
• 页数: 4页
• 分类号: TS252.7
• 字数: 3466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2230.2009.11.011

摘要

利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术建立一种快速检测原料乳中大肠杆菌数量的方法.根据大肠杆菌的ITS保守序列设计特异性引物,应用常规PCR方法确定引物特异性,然后优化SYBR Green Ⅰ的添加量和Mg2+的额外添加量,确定对原料乳中大肠杆菌的最低检测限.结果表明,引物具有很强的特异性,最终确定的SYBR Green Ⅰ(20×)的添加量为0.75 μL,Mg2+的额外添加量为0.875 mmol/L;在不增菌的前提下,对原料乳中大肠杆菌的最低检测限为1.7×103 mL-1.检测的10份样品中有四份样品的大肠杆菌数超过103 mL-1,与平板菌落计数结果无显著差异.该方法特异性强,灵敏度高,操作简便快捷,整个检测过程仅需3 h,具有较大的推广及应用价值.