人类3-磷酸甘油醛脱氢酶的原核表达、纯化和鉴定

• 作者: 万涛 张文露 李毅 杨琴 汤华 蔡雪飞
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) 原核表达 SDS-PAGE 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 102-105
• 页数: 4页
• 分类号: Q5
• 字数: 3076字
• 语种: 中文

摘要

为了研究3-磷酸甘油醛脱氧酶(GAPDH)化生物学功能,以pcDNA3.1-GAPDH质粒为模板,PCR方法扩增GAPDH基因,经BamHI和SalI双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,构建His-GAPDH融合蛋白表达质粒pET32a(+)-GAPDH;转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选,扩增目的质粒;转化大肠杆菌BL21菌株,经IPTG诱导产生融合蛋白,亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blotting检测GAPDH蛋白表达情况.结果表明,构建的人GAPDH基因表达载体经序列测定证实,与GenBank数据完全一致;双酶切鉴定证实,克隆基因正确插入pET32a(+)载体;表达质粒pET32a(+)-GAPDH在大肠杆菌BL21中成功地诱导表达了可溶性His-GAPDH融合蛋白,纯化后SDS-PAGE和Western blotting检测证实融合蛋白表达成功.人GAPDH原核表达载体的成功构建,及6His-GAPDH融合蛋白的正确表达,为进一步深入研究GAPDH的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨琴	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	88	389	11.0	14.0
2	张文露	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	14	34	3.0	5.0
3	李毅	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	22	134	5.0	11.0
4	汤华	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	16	40	3.0	5.0
5	蔡雪飞	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	11	26	3.0	5.0
6	万涛	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	7	17	3.0	4.0