人pre-mir181a腺病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 傅震 尤永平 李凯 石磊 钱春发 颜伟
• 来源期刊: 临床神经外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微RNA 腺病毒 基因 治疗
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 分类号: R730.264
• 字数: 2490字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-7770.2009.03.001

摘要

目的 探讨构建携带人pre-mir181a基因的重组腺病毒载体,为基因治疗研究提供一种新的方法,并观察其在神经胶质瘤细胞U251细胞中的表达.方法 以从Genesil公司购买的含有mir181a的质粒为模板扩增pre-mir181a基因,将回收的PCR产物片段克隆入pGenesil载体,获得重组质粒pGenesil-pre-mir-181a.从pGenesil-pre-mir181a上通过LR体外同源重组将mir181a microRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上.在体外用不同感染复数(M·O·I)值rAd5-mir181ab分别转染神经胶质瘤细胞U251细胞.采用流式细胞仪、RT-PCR方法检测目的 基因的转染效率和表达.结果 PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明,重组腺病毒rAd5-mir181a构建正确.神经胶质瘤细胞U251细胞转染rAd5-mir181a的最高效率可达99%,转染后的神经胶质瘤细胞U251细胞表达相应的mir181a.结论 本实验成功构建了含mir181a基因的重组腺病毒rAd5-mir181a载体,在体外能高效转染神经胶质瘤细胞U251细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅震	南京医科大学第一附属医院神经外科	110	506	12.0	15.0
2	尤永平	南京医科大学第一附属医院神经外科	72	306	10.0	14.0
3	石磊	南京医科大学第一附属医院神经外科	16	42	3.0	6.0
4	钱春发	南京医科大学第一附属医院神经外科	16	38	3.0	5.0
5	颜伟	南京医科大学第一附属医院神经外科	17	38	4.0	5.0
6	李凯		9	48	4.0	6.0