RT-LAMP快速检测Norwalk病毒GⅡ型

• 作者: 宋克云 张如胜 杨秋林 欧新华 苏良
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录环介导等温扩增 Norwalk病毒GⅡ RNA聚合酶 检测
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 291-295
• 页数: 5页
• 分类号: R373.2
• 语种: 中文

摘要

建立一种检测Norwalk病毒GⅡ型快速、敏感的一步逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription-loop-me-diated isothermal amplification,RT-LAMP)方法.针对Norwalk病毒RNA聚合酶基冈特异性序列的6个区域设计4条LAMP引物,65℃保温约120 min,完成对Norwalk病毒GⅡ的扩增,扩增产物通过肉眼观察、SYBR GreenⅠ染色、凝胶电泳及酶切消化进行鉴定.利用RT-LAMP和RT-PCR方法同时检测48份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本来验证RT-LAMP方法的特异性;将Norwalk病毒GⅠⅡ RNA一系列稀释后用RT-LAMP和RT-PCR方法进行检测来比较两者敏感性.46份Norwalk病毒GⅠⅡ粪便标本出现LAMP扩增反应:通过肉眼观察、SYBR Green Ⅰ染色和凝胶电泳均能观察到LAMP扩增产物的存在,LAMP产物的特异性通过酶切消化加以证实;2份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本未出现RT-LAMP扩增.RT-LAMP与RT-PCR特异性符合率为100%,RT-LAMP和RT-PCR检测Norwalk病毒GⅡ的检测下限均为15.6pg/管.与RT-PCR相比较,一步RT-LAMP法检测粪便中Norwalk病毒GⅡ的方法是一种快速、敏感、特异且准确的方法,有望用于快速检测感染性腹泻暴发时粪便中的Norwalk病毒GⅡ.