分枝杆菌同源可控表达系统的建立及其应用

• 作者: 朱召芹 范小勇 赵国屏 郭建 郭盛淇 马辉
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌 乙酰胺酶 启动子 同源表达 可诱导表达
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 1104-1109
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5041字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.12.013

摘要

目的 构建分枝杆菌可控表达载体,利用其过表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tu-berculosis,Mtb)的免疫保护性抗原,亲和层析纯化后分析免疫原性.方法 应用PCR扩增耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)乙酰胺酶编码基因启动子(pACE),构建分枝杆菌可控表达载体pMF系列;克隆Mtb嵌合抗原编码基因并用乙酰胺进行诱导表达,以Ni~(2+)亲和层析纯化重组蛋白;并用该重组嵌合抗原Ag856A2对卡介苗(BCG)免疫的小鼠脾细胞进行体外刺激,以IFN-γ酶联免疫斑点技术(ELISPOT)分析其免疫原性.结果 成功构建了分枝杆菌可控表达载体pMF系列,利用0.02%乙酰胺进行诱导可实现目标抗原在Ms中的高水平表达;同时利用引入的6×His标签可方便实现重组抗原的一步纯化,且该同源表达重组抗原可诱导更高水平IFN-γ的分泌.结论 以Ms乙酰胺酶编码基因启动子pACE为基础构建的分枝杆菌可控表达系统可实现Mtb抗原在Ms中的高水平表达与纯化,与大肠杆萧异源表达相比,该同源表达重组抗原具有更好的免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵国屏	复旦大学生命科学学院微生物系	5	6	1.0	2.0
2	郭盛淇		9	42	3.0	6.0
3	郭建	复旦大学附属上海市公共卫生临床中心	82	27	2.0	4.0
4	马辉	复旦大学生命科学学院微生物系	7	20	3.0	4.0
5	朱召芹	复旦大学附属上海市公共卫生临床中心	4	5	1.0	2.0