第208位异亮氨酸对人细胞色素P4502A6尼古丁代谢活性的影响

• 作者: Clifford WEISEL 何晓阳 徐旭 洪钧言 王守林
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞色素P450 CYP2A6 细胞色素P450 CYP2A13 尼古丁
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 464-471
• 页数: 8页
• 分类号: R969.1
• 字数: 5960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2009.06.008

摘要

目的 探讨人体尼古丁主要代谢酶细胞色素P450 (CYP)2A6及其同族成员CYP2A13肽链结构中,影响其尼古丁5′-羟化代谢活性的关键性氨基酸残基.方法 使用前期制备的CYP2A6和CYP2A13系列氨基酸互换突变体: CYP2A6V117A, CYP2A6G164H, CYP2A6I208S, CYP2A6R372H和CYP2A6S465P以及CYP2A13A117V, CYP2A13H164G, CYP2A13S208I,CYP2A13H372R和CYP2A13P465S,比较其与相应野生蛋白酶的尼古丁5′-羟化催化反应的动力学参数.结果 各突变体对2个CYP2A蛋白酶的尼古丁代谢活性影响不同.对于CYP2A6,I208S突变对酶活性的影响显著,导致表观反应常数Km及最大反应速度Vmax由野生型62.25 μmol·L~(-1)和6.53 mol·min~(-1)·moL~(-1)变化为345 μmol·L~(-1)和2.19 mol·min~(-1)·moL~(-1),但该位点对CYP2A13酶活性无显著影响;对于CYP2A13,H372R突变对酶活性的影响最为显著,导致Km 及Vmax由野生型的26.01 μmol·L~(-1)和24.51 mol·min~(-1)·moL~(-1)变为148.7 μmol·L~(-1)和6.11 mol·min~(-1)·moL~(-1), 此位点对CYP2A6无显著影响. 其他位点突变对酶活性影响较小或不显著.结论 CYP2A家族蛋白中,I208与H372分别是影响CYP2A6和CYP2A13对尼古丁代谢的关键残基.对于同家族蛋白酶而言,关键性氨基酸的作用并不总是一一对应.