日本血吸虫信号通路相关基因SjWD101的生物信息学分析及其克隆与表达

• 作者: 余新炳 刘玲 徐劲 胡旭初 赵宇 陈守义 黄灿
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 WD40结构域 生物信息学 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-8
• 页数: 5页
• 分类号: R383.2
• 字数: 4294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2009.01.002

摘要

目的 利用生物信息学方法分析日本血吸虫SjWD101的结构和功能特征,并利用基因工程技术进行克隆和表达,获得相应的重组蛋白.方法 从日本血吸虫GenBank数据库中筛选WD家族蛋白中全长基因,用相关软件进行生物信息学预测.通过RT-PCR扩增出全长编码区序列,克隆到表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,表达产物用镍离子金属螯合剂亲和层析柱纯化并经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blotting)鉴定.结果 SjWD101是一个全长1085bp的基因,编码区为66～950,编码294个氨基酸,软件分析表明其理论分子量和等电点分别是31819.7Da和6.44.亚细胞定位分析表明该蛋白是胞浆蛋白,理化性质较稳定.二级结构以反向平行的β折叠为主.含有6个WD40结构域,属于WD蛋白家族中的一员,具有GTP结合蛋白的结构特征.经PCR、双酶切和测序证实pET-28a(+)-SjWD101构建成功.SDS-PAGE和Western blotting证实重组菌成功表达出融合蛋白,经His亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白,Western blotting证实WD101重组蛋白能被感染日本血吸虫的兔血清识别.结论 日本血吸虫WD101经生物信息学预测为WD家族蛋白,可能在血吸虫信号转导通路方面有其一定作用,本研究获得了纯化的重组蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	201	1352	17.0	28.0
2	徐劲	中山大学中山医学院	104	568	13.0	17.0
3	胡旭初	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	108	574	13.0	17.0
4	陈守义	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	31	211	8.0	13.0
8	刘玲	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	36	357	9.0	18.0
9	黄灿	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	22	139	6.0	11.0
10	赵宇	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	1	4	1.0	1.0