5种人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的初步建立

• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 裂谷热病毒 戊型肝炎病毒 狂犬病毒 水泡性口炎病毒 口蹄疫病毒 多重RT-PCR
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 诊断技术
• 页码范围: 785-789
• 页数: 5页
• 分类号: S854.44
• 字数: 4197字
• 语种: 中文

摘要

为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMOV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,通过优化反应条件,建立检测以上5种病毒的多重RT-PCR方法.通过对同一种属的其他病毒及相关病毒的检测,确定方法的特异性;通过对体外转录合成的RNA进行定量检测的方法,确定方法的敏感度.实验结果表明:在同一RT-PCR反应体系中可同时检测以上5种病毒,扩增片段长度分别为499 bp、137 bp、274 bp、224 bp、389 bp;而对新城疫病毒(NDV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛流行热病毒(BEFV)和乙型脑炎病毒(JBEV)的检测均为阴性;5种病毒RNA的最低检测拷贝数分别为2.91×104、3.14×1 03、1.25×103、6.65×103和2.38×104.利用该方法对11份RV已知阳性样本和7份HEV已知阳性样本检测结果均呈阳性.本研究建立了一种快速、可同时检测5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性.