禽流感群特异性间接原位RT-PCR检测方法

• 作者: 任涛 廖明 廖秀云 曹伟胜 杨素 沙才华 王娟 秦爱建 薄清如 陈博文
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感 群特异性 细胞涂片 石蜡切片 间接原位RT-PCR
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1534-1538,1556
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

从GenBank下载禽流感病毒(Auian in fluenza virus,AIV)NP基因序列,通过比对选取NP基因中较为保守的片段,设计1对引物,通过RT-PCR方法扩增270 bp的目的片段,经测序确认目的片段序列正确后,用地高辛标记扩增产物制备探针.在BSL-3实验室,用AIV人工感染鸡胚成纤维细胞和SPF鸡后,制作细胞涂片和组织石蜡切片,然后在经前处理后的细胞涂片和石蜡切片上进行原位RT-PCR,再与地高辛标记的探针进行原位杂交,对细胞和组织中的AIV进行检测和定位.研究结果表明,本方法能检测出约1μg/L质粒的DNA,并能特异性地在细胞涂片和石蜡组织切片中检测和定位AIV,且成纤维细胞感染病毒8 h后即可检测到阳性信号,具有良好的特异性和较高的敏感性,为动物组织中AIV的检测定位和致病机理研究提供了敏感、特异和更为直观的方法.