利用线性指数PCR-焦磷酸测序技术快速检测3种海洋弧菌

• 作者: 周国华 奚涛 朱术会 杨会勇 那广水 邹秉杰
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 海洋弧菌 LATE-PCR 焦磷酸测序 16SrRNA基因 外膜蛋白K基因
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 460-464
• 页数: 5页
• 分类号: Q819
• 字数: 3238字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5048.2009.05.016

摘要

目的:建立一种基于线性指数聚合酶链式反应(linear-after-the-exponential PCR,LATE-PCR)焦磷酸测序技术快速检测致病性海洋弧菌的方法.方法:首先根据海洋弧菌的16S rRNA基因和外膜蛋白K(OmpK)基因的目的片段设计引物并优化反应条件进行LATE-PCR扩增,其次利用酶促反应处理PCR产物中干扰焦磷酸测序反应的副产物,最后加入退火引物后直接进行焦磷酸测序.结果:成功进行了LATE-PCR扩增,制备出足量单链DNA模板供焦磷酸测序反应;取1～2μL的PCR产物即可获得理想的焦磷酸测序信号.测序结果与Sanger法的结果一致,测得序列与GenBank所报道的相符合.通过对16S rRNA基因片段的检测,可以确认样品是否为海洋弧菌;通过对OmpK基因目的片段的检测可以初步区分弧菌种类,对3种常见弧菌:副溶血弧菌、哈维弧菌和溶藻弧菌成功地进行了检测.结论:本方法结果准确,灵敏度高,操作简便且成本低,可快速检测大量样品,在弧菌快速检测和诊断中具有很好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	奚涛	中国药科大学生命科学与技术学院	138	927	15.0	25.0
2	那广水	国家海洋环境监测中心海域生态环境重点实验室	30	421	11.0	20.0
3	邹秉杰	中国药科大学生命科学与技术学院	7	43	4.0	6.0
7	朱术会	中国药科大学生命科学与技术学院	3	19	3.0	3.0
9	杨会勇	中国药科大学生命科学与技术学院	2	9	2.0	2.0