高效抑制核因子κ-B的茎环RNA基因序列的获得

• 作者: 尹心宝 杜涛 林天歆 江春 许可慰 郭正辉 韩金利 黄健 黄海
• 来源期刊: 中华腔镜泌尿外科杂志（电子版）
• 关键词: 核因子kappa-B 前列腺癌 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 444-448
• 页数: 5页
• 字数: 3868字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-3253.2009.05.018

摘要

目的 获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa-B表达的shRNA序列. 方法根据核因子kappa-B基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对核因子kappa-B基因cds区的siRNA序列及无意义的对照序列,组建与之对应的4对互补的单链DNA序列,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5'向3'顺序依次为:酶切位点(BamH I)、干扰序列(19bp)、loop环(TTCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19bp)、中止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR I).将合成的序列插入空载体pSIHl一H1一copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time PCR检测不同序列片断对核因子kap-pa-B的mRNA抑制效果.结果 设计的3条针对核因子kappa-B的序列中第3条的抑制效果最好,目的 序列位于核因子KAPPA-B (NM_021975)的1096到1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCA TTCAAGAGA TGACG-TAAAGGGATAGGGC TTTTT G-3'.其对前列腺癌细胞株中核因子kappa-B的mRNA的干扰效率为59%,对其蛋白表达的抑制率为81%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达核因子kappa-B.结论 成功获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa-B表达的shRNA序列,为后期研究核因子kappa-B在前列腺癌发病中的作用机理等研究提供了基础.