牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

• 作者: 吴玉石 周毅 周祖涛 张睿 段宏安 毕丁仁 石德时
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛白血病病毒 gp51蛋白 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 538-543
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.3|S858.235.3
• 字数: 4403字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.04.014

摘要

从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp.将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性.以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法.结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg·mL-1,血清的最佳稀释倍数为1:80,阳性判定标准确定为样品OD450nm大于0.451.用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%.